艾滋病的實驗室檢測流程

　　中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心繼發(fā)布《全國艾滋病檢測技術規(guī)范(2009 年版)》后，近日即將發(fā)布 2015 年版《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》，此規(guī)范堪稱艾滋病檢測實驗室的「紅寶書」，適用于疾病控制中心艾滋病確認實驗室和醫(yī)療機構的艾滋病初篩實驗室的 HIV 檢測技術操作。下面是yjbys小編為大家?guī)�來的艾滋病的實驗室檢測流程的知識，歡迎閱讀。

　　檢測項目的樣品種類

　　1 HIV 抗體檢測：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。

　　2 HIV 抗原檢測：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液。

　　3 T 淋巴細胞亞群測定：EDTA 或肝素抗凝全血。

　　4 HIV-1 病毒載量、基因型、耐藥檢測：血漿、濾紙干血斑(DBS)。

　　5 HIV 核酸定性與定量、基因型檢測和 HIV-1 分離培養(yǎng)：淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞(PBMC)及全血。

　　當然，實驗室最常用的仍然是血液標本，其他只作為補充樣本。

　　HIV 抗體檢測

　　HIV 抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優(yōu)先選擇項目，在國內絕大多數(shù)初篩實驗室應用最廣泛。

　　1 初篩方法

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

　　ELISA 法檢測 HIV 抗體是 HIV 初篩實驗室最常用最普遍的方法，目前檢測試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時檢測血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體，秉承「寧可錯殺一千，不可漏網(wǎng)一個」的革命精神，其靈敏度遠高于特異性，直叫 HIV 抗體無處遁形。

　　(2)化學發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)

　　這個試驗方法是近 10 年迅猛發(fā)展的一種新型檢測方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測定結果，其靈敏度較 ELISA 有了進一步的提高，同時帶來的是檢測成本的增加和假陽性率的增高。

　　(3)快速檢測(RT)方法

　　此類方法操作簡便快速，適用于應急檢測、門診急診檢測，但靈敏度和特異性遠不如 ELISA 和發(fā)光法，但是經(jīng)濟實惠，也有一定的市場影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。

　　2 確認實驗

　　(1)免疫印跡試驗(WB)

　　WB 采用間接法檢測樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開來，經(jīng)過一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結合的抗體條帶，從而確診抗體的存在。

　　(2)條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)

　　實驗原理基本同 WB 法，不再贅述。

　　HIV-1 抗原檢測

　　1 篩查實驗

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)：即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測試劑盒。抗體包被固相反應孔(管)的底部，待測樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復合物，再加入酶(HRP)標記的 HIV-1 抗體與抗原結合，加底物顯色，在酶標儀上讀取結果。因同時檢測抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了 HIV 感染的檢測窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實驗室推廣有一定難度。

　　(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：待測樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內的 p24 抗體結合，并被生物素標記的 p24 抗體識別。臨床實驗室應用前景不明朗，需要熒光檢測設備，成本較高。

　　(3)電化學發(fā)光法(ECLIA)：待測樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標記的抗體在反應管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標記抗體復合物。

　　(4)抗原抗體快速檢測法：同快速方法(RT)檢測抗體，不同之處是用 HIV 抗體包被載體，檢測靈敏度同樣較差。

　　2 中和試驗

　　中和試驗主要是 p24 抗原檢測的補充試驗，還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測，以排除篩查試驗的假陽性。

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)：待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在 p24 抗原，中和抗體將與之結合形成復合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結合。

　　(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　(3)電化學發(fā)光法 (ECLIA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率大于 50%，認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　HIV 核酸檢測

　　目前國內 HIV 核酸檢測試劑主要為 Taqman 實時熒光 PCR 檢測試劑，可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于檢測 RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷 HIV-1 急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國 FDA 批準的 Gen-Probe 公司生產的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測試劑和歐盟批準的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測試劑。

　　臨床診斷相關的檢測策略及結果報告

　　HIV 檢測陽性結果的檢測過程一般經(jīng)歷兩個階段，初篩和復檢程序。以 HIV 抗體檢測為例，具體流程如下：

　　試劑 1 進行初篩，結果無反應，報告「HIV 抗體陰性」;結果有反應，不能出具陽性報告，必須進入復檢試驗。對初篩有反應的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進行復檢試驗(或者兩種試劑復檢)，如均無反應，報告「HIV 抗體陰性」;如均有反應或一個有反應一個無反應，進行補充試驗(抗體確證試驗和 HIV-1 核酸試驗)，報告 HIV 感染待確定。

　　目前大部分臨床實驗室為艾滋病初篩實驗室，開展常規(guī)初篩實驗，發(fā)現(xiàn)陽性結果初步復檢后送省市 CDC 或當?shù)仄渌�確認實驗室做確認實驗。臨床診斷篩查檢測流程見下圖：

　　目前國內實驗室多采用「初篩抗體+WB 法確認」等兩步法進行 HIV 檢測及確診，并嚴格進行人員、儀器、方法學質量控制，建立了遍布全國的臨床醫(yī)療機構的初篩實驗室及省市 CDC 的確認實驗室，基本滿足了日益增長的艾滋病病人的檢測及病情的變化的監(jiān)測。

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