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2017年臨床檢驗(yàn)技師臨床免疫學(xué)知識(shí)：酶
導(dǎo)語：酶指具有生物催化功能的高分子物質(zhì)， 在酶的催化反應(yīng)體系中，反應(yīng)物分子被稱為底物，底物通過酶的催化轉(zhuǎn)化為另一種分子。常見的酶有哪些?一起來看看吧。
1常用的酶：
1.辣根過氧化物酶(HRP)，應(yīng)用最廣泛，強(qiáng)酸是其強(qiáng)烈抑制劑，采用硫酸作為反應(yīng)終止劑。避免使用疊氮鈉作為酶標(biāo)復(fù)合物的防腐劑。
2.堿性磷酸酶(ALP)，含磷酸鹽的緩沖液對(duì)酶具有抑制作用，不能用磷酸鹽緩沖液PBS
3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)
常用的底物：
1.HRP有鄰苯二胺(OPD)，最敏感，顯橙黃色，硫酸終止后呈棕黃色、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，最常用，作用后顯藍(lán)色，終止后變?yōu)辄S色。
2.ALP有對(duì)-硝基苯磷酸酯(p-NPP)，用NaO H 作為反應(yīng)終止劑。
3.β-Gal有
4-甲基傘形酮-β-D半乳糖苷(4MUG)。
常用的標(biāo)記方法：交聯(lián)法(戊二醛~)和直接法(改良過碘酸鈉法)
固相載體的選擇：塑料制品(聚苯乙烯、聚氯乙烯)、微粒、膜載體
2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
原理：把抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面并保持其免疫活性，即形成固相抗原或抗體;將抗原或抗體與酶連接成酶標(biāo)記抗原或抗體，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性;在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本(含待測抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)形成固相化抗原抗體-酶復(fù)合物，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體-酶復(fù)合物與其它成分分離，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產(chǎn)物，通過定性或定量檢測有色產(chǎn)物的量即可確定樣品中待測物質(zhì)的含量。
方法類型：ELISA檢測抗原的方法主要有：
①雙抗體夾心法：適用于至少兩個(gè)抗原決定簇(AD)的Ag。
先將特異性抗體與固相載體結(jié)合，形成固相抗體，加入待測標(biāo)本并溫育，使標(biāo)本中的抗原與固相抗體充分反應(yīng)，形成固相抗體抗原復(fù)合物，洗滌去除其他游離成分;然后加入酶標(biāo)記抗體并溫育，使固相抗體抗原復(fù)合物與酶標(biāo)記抗體結(jié)合，形成 固相抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體 復(fù)合物，為“雙抗體夾心”;洗滌去除游離酶標(biāo)記抗體。加入底物，固相載體結(jié)合的酶可催化底物成為有色產(chǎn)物，根據(jù)產(chǎn)物的顯色程度進(jìn)行抗原的定性或定量檢測。
臨床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人絨毛膜促性腺激素HCG等項(xiàng)目的檢測。
②雙位點(diǎn)一步法：該法是針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的抗原決定簇，
分別制備兩種單克隆抗體，在包被時(shí)使用一種單抗，酶標(biāo)記時(shí)使用另一種單抗。測定時(shí)將含待測抗原標(biāo)本和酶標(biāo)記抗體同時(shí)加入反應(yīng)體系，兩種抗體分別與不同的抗原決定簇結(jié)合，只進(jìn)行一次溫育，在洗滌后即可加底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。擔(dān)當(dāng)待測抗原濃度過高時(shí)，可出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果，必要時(shí)可將標(biāo)本適當(dāng)稀釋后重新測定。)
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