關于微生物生長的幾種檢測方法
一、生長量測定法
1.1體積測量法：又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鐘）和轉速（如5000rpm），離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。
1.2稱干重法：
可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，并用清水離心洗滌1-5次，進行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用紅外線烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾后用少量水洗滌，在40℃下進行真空干燥。稱干重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常采用這種方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3比濁法：
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可采用一種特制的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用于發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.Coli的生長及誘導時間。
1.4菌絲長度測量法：
對于絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一只一端開口并帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長
二、微生物計數法
2.1血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平臺，兩嵴的表比兩平臺的表面高0.1mm，每個平臺上刻有不同規格的格網，中央0.1mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜于單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，并且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
2.2染色計數法：
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。借助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色后在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
2.3比例計數法：
將已知顆粒（如霉菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標準。
2.4液體稀釋法：
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養液的試管中，經培養后記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然后查最大或然數表MPN（mostprobablynumber）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
2.5平板菌落計數法：
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定
體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液涂布于已凝固的固體培養基平板上。保溫培養后，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。
2.6試劑紙法：
在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養。短期培養后在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7膜過濾法：
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
2.8生理指標法：
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸堿度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。
2.9測定含氮量：
大多數細菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱后產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2后即可測出N2的量。
2.10測定含碳量：
將少量（干重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線。
2.11還原糖測定法：
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生(轉載于:mHg）的條件下才能生長，他們有完整的呼吸鏈，以分子氧為最終氫受體，具有超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶。
兼性厭氧菌:它是以在有氧條件下的生長為主也可兼在厭氧條件下生長的'微生物，有時也稱“兼性好氧菌”。
微好氧菌:只能在嬌滴滴額氧分壓（1.33~3.Pa，正常大氣中的氧分壓為0.2bar）下才能正常生長的微生物。
耐氧菌:耐氧性厭氧菌的簡稱，是一類可在分子氧存在下進行發酵性厭氧生活的厭氧菌。
厭氧菌:有一般厭氧菌與嚴格厭氧菌（專性厭氧菌）之分。
超氧陰離子自由基:活性氧的形式之一，因有奇數電子，故帶負電荷；它既有分子性質，又有離子性質；其性質極不穩定，化學反應力極強，在細胞內可破壞各種重要生物大分子和膜結構，還可形成其他活性氧化物，故對生物體極其有害。
超氧化物歧化酶(SOD):保護好氧菌免受超氧化物陰離子自由基的毒害的酶。按SOD分子中所含金屬輔基的不同分三類：1、含Cu、Zn的SOD，存在于幾乎所有真核生物的細胞質中；2、含Fe的SOD，主要存在原核生物中；3、含Mn的SOD，主要存在于真核生物的線粒體中。SOD除可清除超氧陰離子自由基外，還發現在防治人體衰老、治療自身免疫性疾病、抗癌、防白內障、治療放射病和肺氣腫以及解除苯中毒等方面有一系列療效。
PRAS培養基:用嚴格厭氧方法配置、分裝、滅菌后的厭氧菌培養基，稱為預還原無氧滅菌培養基，即PRAS培養基。
厭氧罐:培養厭氧菌的裝置。
亨蓋特滾管技術:一種集制備高純氮、以氮驅氧和全過程實現無氧操作、無氧培養、無氧檢測于一體，用于研究嚴格厭氧菌的技術和裝置。
厭氧手套箱:一種用于無氧操作和培養嚴格厭氧菌的箱形密閉裝置。
搖瓶培養:一般將三角瓶內培養液的瓶口用8層紗布包扎，以利通氣和防止雜菌污染，同時減少瓶內裝液量，把它放在往復式或旋轉式搖床上作有節奏的震蕩，以達到提高溶氧量的目的。
曲:是一類用麩皮、米糠等疏松的固體營養料接種、培養微生物而制成的含氧活菌產品。
曲法培養:將麩皮、碎麥或豆餅等固態基質經蒸煮和自然接種后，薄薄地鋪在培養容器表面，使微生物即可獲得充足的氧氣，又有利于散發熱量，對真菌來說，還有利于產生大量孢子。
通風曲:一種機械化程度和生產效率都較高的現代大規模制曲技術，在我國醬油釀造業中廣泛應用。
污染:有害微生物通過氣流、水流、接觸和人工接種等方式，傳播到合適的基質或生物對象上而造成種種危害。
巴氏消毒法:有發過微生物學家巴斯德用于果酒消毒，故名。這是一種專用于牛奶、啤酒、果酒或醬油等不宜進行高溫滅菌的也太風味食品或調料的低溫消毒方法（一般在60-85度下處理30min至15s）。有兩種方法：1、低溫維持法；2、高溫瞬時法。
間歇滅菌法:適用于不耐熱的培養基滅菌。方法是：講帶滅菌的培養基放在80-100度下蒸煮15-60min，以殺滅其中所有的微生物營養體，然后放至室溫37度下保溫過
夜，誘使其中殘存的芽孢發芽，第二天再以同樣方法蒸煮和保溫過夜，如此重復3天即可在較低的滅菌溫度下同樣達到徹底滅菌的效果。
連續加壓蒸氣滅菌法:讓培養基在管道的流動過程中快速升溫、維持和冷卻，然后流進發酵罐。
梅拉特反應:高溫滅菌時，培養基中得氨基化合物（氨基酸、肽、蛋白質）的游離氨基與羧基化合物（糖類）的羰基間發生復雜的化學反應，導致培養基褐變同時，還降低了有關營養物成分，故應設法避免。
石炭酸系數:一定時期內，被試藥劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達到同效果的石炭酸的最高稀釋度之比。
抗生素:一類有微生物或其他生物生命活動過程中合成的此生代謝產物或其人工衍生物，他們在很低濃度時就能一直或干擾他種生物的生命活力，因而可用作有兩的化學治療劑。
抗代謝藥物:一類在化學結構上與細胞內必要代謝物的結構相似，并可干擾正常代謝活動的化學物質。3種作用：1、與正常代謝物一起共同競爭酶的活性中心，從而使微生物正常代謝所需要的重要物質無法正常合成，例如磺胺類；2、“假冒”正常代謝物，使微生物合成出無法正常生理活動的假產物，如8-重氮鳥嘌呤取代鳥嘌呤而合成的核苷酸就會產生無正常功能的RNA；3、某些抗代謝藥物與某一生化合成途徑的終產物結構類似，可通過反饋調節破壞正常代謝調節機制，例如，6-巰基腺嘌呤可抑制腺嘌呤核苷酸的合成。
選擇毒力:大于病原菌具高度毒力而對其宿主基本無毒的化學物質來抑制宿主體內病源微生物的生長繁殖，借以達到治療該宿主傳染病的一種措施。
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