2017年臨床檢驗技師臨床免疫學備考考點

　　導語：雖然酶大多是蛋白質，但少數具有生物催化功能的分子并非為蛋白質，有一些被稱為核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通過人工合成所謂人工酶也具有與酶類似的催化活性，包括人工合成的DNA。一起來看看吧。

　　1.免疫組織化學技術：

　　又稱免疫細胞化學技術，是指用標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。

　　種類： 熒光免疫組織化學技術、酶免疫組織化學技術、免疫金(銀)組織化學技術、親和組織化學技術、免疫電競組織化學技術等

　　基本過程：

　　1.抗原的提取和純化

　　2.免疫動物或細胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化

　　3.將標記物與抗體結合形成標記抗體

　　4.標本的處理與制備

　　5.抗原抗體免疫學反應以及標記物呈色反應

　　6.觀察結果

　　2.非標記抗體酶免疫組織化學染色

　　【技術類型】

　　(一)酶橋法

　　抗酶抗體作為第三抗體，通過橋抗體(第二抗體)將特異性識別組織抗原的第一抗體連接，形成酶聯的 抗原-抗體 復合物，加底物顯色。

　　本法較酶標法的敏感性有所提高，但操作分四步較為復雜。

　　(二)過氧化物酶抗過氧化物酶酶(PAP)法

　　是在酶橋法的基礎上加以改良。本法首先將酶橋法的第三抗體(抗酶抗體)與酶組成可溶性復合物(PAP復合物)。該復合物由兩個抗酶抗體和三個過氧化物酶分子組成，呈五角形結構，非常穩定。

　　通過橋抗體(第二抗體)，將特異性識別組織抗原的第一抗體與PAP復合物的抗酶抗體連接起來，此時要求特異性第一抗體與第三抗體的動物種屬相同

　　(三)雙橋PAP法

　　該法建立在PAP法的基礎上。其基本原理是在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP復合物而建立起來的，通過雙橋可結合更多的PAP復合物于抗原分子上，以增強敏感性。這種放大方式重復使用橋抗體，使橋抗體與PAP復合物中抗酶抗體的未飽和Fc段結合，或橋抗體與特異性第一抗體未飽和的Fc段結合。如此對抗原有明顯放大作用，對于組織細胞微量抗原的檢測又實用價值。

　　(四)堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法(APAAP)法

　　因部分組織細胞內含內源性過氧化物酶，限制了HRP的廣泛應用，需選用其他酶免疫組織化學反應。本法是用堿性磷酸酶(ALP)代替HRP建立的堿性磷酸酶(ALP)-抗堿性磷酸酶(AAP)法，簡稱APAAP。其技術要點與PAP法相似。

　　【常用酶及顯色底物】

　　最常用的是辣根過氧化物酶(HRP)，常用的供氫體有二氨基聯苯胺(DAB)，反應產物呈棕色。其他有：氨基乙基卡巴唑(AEC)，反應產物為橘紅色;4-氯-1-萘酚，反應產物為灰藍色。

　　堿性磷酸酶為磷酸酯的水解酶，可通過兩種反應顯色：①偶氮偶聯反應，最終與重氮化合物作用生成不溶沉淀，如快藍為深藍色，快紅為紅色。②靛藍四唑反應，最終形成紫藍色不溶沉淀。

　　3.親和組織化學類型： 生物素-親和素法(親和素-生物素-過氧化酶復合物技術ABC、橋聯親和素-生物素技術BRAB、標記親和素-生物素技術LAB)、葡萄球菌蛋白A法、凝集素法、鏈霉親和素-生物素法。

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